Strategi Isolasi Bakteri (Penghasil Enzim Amilase)

Soal:

Jelaskan strategi isolasi yang anda lakukan jika anda ingin mendapatkan isolat bakteri yang mampu menghasilkan:

a.        Enzim amilase

b.       Enzim amilase tahan suhu tinggi

Jawab:

a.    .Isolat bakteri penghasil enzim amilase dapat diperoleh melalui uji iodin pada media Luria agar yang digunakan sebagai media pertumbuhan isolat-isolat tersebut. Media Luria agar, terdiri dari 5 g ekstrak yeast, 5 g tripton/pepton, 3 g NaCl, 5 g tepung agar, dilarutkan dalam 1 Liter aquades dan disterilkan. Setelah media padat, sebanyak 0,1 mL sampel air disebar dengan hoki stik pada permukaan agar, kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 50°C. Setelah itu pada koloni bakteri yang terbentuk dituangkan larutan lugol atau larutan iodium. Jika pada koloni bakteri tersebut terbentuk suatu zona bening di sekitarnya, hal tersebut mengindikasikan bahwa koloni bakteri tersebut dapat menghasilkan enzim amilase. Untuk dapat mengisolasi bakteri penghasil amilase (misalnya: Bacillus sp) dapat dikondisikan pada pH 7, dengan suhu maksimal 50°C.

b.       Isolat bakteri (termofil) penghasil enzim amilase yang tahan terhadap suhu tinggi dapat diperoleh melalui uji iodin pada media Luria agar. Prosedurnya sama, hanya saja sampel air yang disebar pada media padat diganti dengan air panas. Setelah terbentuk koloni bakteri pada media Luria agar, dapat diambil 1 Ose yang kemudian digoreskan pada cawan petri yang berisikan media agar selektif amilolitik (0,2% yeast ekstrak agar; 0,5% pepton; 0,05% NaCl; 0,05% MgSO₄; 0,015% CaCl₂; 2% tepung agar; dan 1% soluble starch(pati)). Kemudian kultur diinkubasi selama 24 jam pada suhu 65°C. pH optimum bakteri ini untuk dapat tumbuh, yaitu pH 5–6. Setelah itu pada koloni bakteri (isolat) yang terbentuk dituangkan larutan lugol atau larutan iodium. Bila terdapat zona bening pada media (di sekeliling koloni), hal tersebut mengindikasikan enzim amilase diproduksi oleh isolat sehingga di daerah tersebut amilum sudah terhidrolisis. Adapun media yang berwarna biru kehitaman menandakan pati di tempat itu belum terhidrolisis. Warna biru kehitaman terbentuk oleh adanya reaksi antara amilum dengan iodium, dimana iodium masuk ke dalam bagian kosong amilum yang berbentuk spiral.